El 18 de marzo de 1949 el Cardenal Arzobispo de Sevilla Pedro Segura y Sáenz bendijo el nuevo templo destinado a albergar a las Imágenes Titulares de la Hermandad de la Macarena, que hasta entonces se veneraban en su capilla de la Parroquia de San Gil, incendiada en 1936.
El Papa Pablo VI la declaró en 1966 Basílica Menor, agregada a la Basílica de San Juan de Letrán de Roma.
Es un templo de planta basilical, de un sola nave cubierta con bóveda de cañón con lunetos y cuatro capillas laterales, diseñado por Aurelio Gómez Millán. En estilo barroco andaluz, se accede a ella a través de un pórtico que combina arco y dintel sustentados por columnas marmóreas sobre el que se sitúa un entablamento en el que se abre una hornacina que alberga la escultura que representa la virtud teologal de la Esperanza. En un segundo plano de la fachada se levanta una airosa espadaña, ampliada posteriormente en la década de los 90 del siglo XX destacando la presencia de una reproducción a gran tamaño de la corona de salida de la Santísima Virgen de la Esperanza Macarena y la icónica veleta con el lema Aquí está la Esperanza.
El interior del templo se decora con mármoles de varios colores y pinturas al fresco de Rafael Rodríguez, concebidas a partir de un programa iconográfico centrado en la Virgen, Madre de Dios.
Tanto en el presbiterio como en las capillas laterales se sitúan retablos en madera dorada, obras del taller de Juan Pérez Calvo. En el mayor, que alberga a la Santísima Virgen de la Esperanza Macarena, se abre el camarín de la venerada Titular, cuya decoración de orfebrería es una obra maestra del orfebre Fernando Marmolejo Camargo.
Igualmente impresionante es el ante-camarín, una estancia única decorada en 2024 por el pintor Manuel Peña Suárez utilizando la técnica de la pintura al temple.
En las capillas laterales se veneran las Imágenes de Nuestro Padre Jesús de la Sentencia, Nuestra Señora del Santo Rosario, el Señor San José y las Patronas de Hispanoamérica, respectivamente. En esta última capilla se encuentra el Sagrario de la Basílica.
